利巴韋林和金剛烷胺均屬于抗病du藥物，在人類流感類疾病防治領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。我國農(nóng)業(yè)部560號(hào)公告明確規(guī)定抗病du藥物為禁用獸藥，但市場(chǎng)上非法添加的現(xiàn)象仍然存在，而一次性高效檢測(cè)這2種物質(zhì)卻是一大難點(diǎn)。

安譜實(shí)驗(yàn)精心研究推出金剛烷胺/利巴韋林柱，可以同時(shí)分析檢測(cè)利巴韋林和金剛烷胺兩種目標(biāo)物。通過一次實(shí)驗(yàn)，分步洗脫的方式，分別收集得到兩種目標(biāo)物。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證回收率和穩(wěn)定性優(yōu)異，而且流速適中，大大節(jié)省前處理時(shí)間，提高效率，降低檢測(cè)成本。

1前處理
 

前處理方法

      稱取雞肉、雞蛋基質(zhì)樣品2g，置15mL離心管中，加入內(nèi)標(biāo)混合溶液，再加入 5mL 0.25mol/L 乙酸銨溶液(pH=4.8) 和 40μL 100pm 酸性磷酸酶溶液，渦旋 30s，37° C 恒溫避光酶解 2h。在酶解液中加入 4mL 2% 三氯yi酸（pH=4.8）溶液，渦旋 30s，10000 r/min，離心 10min，移取上清液于另一離心管中，用 50% 氨水調(diào) pH 至 8.5±0.1，加水定容至 10mL，再次離心，得到上層澄清提取液。取 5mL 提取液待上樣

活化平衡

      5mL 乙腈、3mL 0.5% 甲酸水、3mL 0.25M 乙酸銨 (pH=8.5)

上樣

      5mL 待上樣液

淋洗1

      3mL 0.25M 乙酸銨 (pH=8.5)、3mL 水，抽干

洗脫1

      2mL 0.5% 甲酸水，收集洗脫液，漩渦混勻后過濾膜，待 LC/MC/MC 檢測(cè)（利巴韋林）

淋洗2

      3mL 甲醇，抽干

洗脫2

      5mL 5% 氨化甲醇（含 10% 異丙醇），收集洗脫液（金剛烷胺）

濃縮

      45 ° C水浴中氮吹近干，加 1mL 0.5% 甲酸水（含 10% 甲醇）定容，混合后，過濾膜，待 LC/MC/MC 檢測(cè)

2色譜條件

      儀器：ACQUITY UPLC 超高效液相色譜儀，串聯(lián) AB 5500 型三重四極桿質(zhì)譜儀，配電噴霧離子源 (ESI)

洗脫程序：

目標(biāo)物離子對(duì)：

3實(shí)驗(yàn)譜圖

圖1 利巴韋林標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖3 標(biāo)準(zhǔn)品中利巴韋林峰（245.1/113.1）

圖4 標(biāo)準(zhǔn)品中 13C5-利巴韋林峰（250.1/113.1）

圖5 雞肉基質(zhì)加標(biāo)過 SBEQ-CA6535 利巴韋林峰

圖6 雞蛋基質(zhì)加標(biāo)過 SBEQ-CA6535 利巴韋林峰

圖7 標(biāo)準(zhǔn)品中金剛烷胺峰（152.2/135）

圖8 標(biāo)準(zhǔn)品中 D15- 金剛烷胺峰（167.2/150.1）

圖9 雞肉基質(zhì)加標(biāo)過 SBEQ-CA6535 金剛烷胺峰

圖10 雞蛋基質(zhì)加標(biāo)過 SBEQ-CA6535 金剛烷胺峰

4實(shí)驗(yàn)結(jié)果

利巴韋林加標(biāo)回收率

金剛烷胺加標(biāo)回收率

結(jié)果討論： 安譜實(shí)驗(yàn)開發(fā)的柱基質(zhì)適用性良好，實(shí)驗(yàn)回收率在 78%~112%，RSD 小于 10%，產(chǎn)品性能與進(jìn)口品牌相當(dāng)，且流速更快大大節(jié)省時(shí)間。

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