近實(shí)驗(yàn)很糟心，標(biāo)準(zhǔn)曲線弄不清。一條要拉幾個(gè)點(diǎn)、濃度范圍怎么選。線性需要幾個(gè)九、期間核查有沒(méi)有……

     的確，大家在標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作過(guò)程中會(huì)有很多的問(wèn)題，今天小編就帶大家全面的了解標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作規(guī)則。一起來(lái)看看吧！

01

Q:什么是校準(zhǔn)曲線？

A:標(biāo)準(zhǔn)曲線就是我們平常大家操作得多的，把標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成不同的濃度點(diǎn)，直接上機(jī)測(cè)試，繪制曲線用于定量。但是如果樣品經(jīng)過(guò)復(fù)雜的前處理，比如消解，萃取或者凈化等過(guò)程，那么目標(biāo)化合物就會(huì)有一定的損耗，用標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)定量是不準(zhǔn)確的，我們就可以用工作曲線。工作曲線就是所使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液經(jīng)過(guò)與樣品相同的前處理，這樣就可以盡量減少前處理帶來(lái)的計(jì)算誤差了。

02

Q:標(biāo)準(zhǔn)曲線要做幾個(gè)點(diǎn)？

A:標(biāo)準(zhǔn)曲線需要幾個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，與所檢測(cè)組分的濃度范圍、檢測(cè)信號(hào)響應(yīng)類(lèi)型、儀器的靈敏度和分辨率都有關(guān)。

對(duì)于一些低濃度，特別是痕量分析，比如二噁英、多氯聯(lián)苯等等，有些樣品的含量在ppb級(jí)別，且濃度范圍不是很大，檢測(cè)器響應(yīng)可靠，背景干擾非常小的，可以選用較少的工作點(diǎn)，有的選三個(gè)濃度點(diǎn)就可以了，有的甚至可以只用一個(gè)濃度點(diǎn)，另一個(gè)點(diǎn)直接用坐標(biāo)原點(diǎn)。

但是對(duì)于一些樣品濃度范圍較寬的，比如頂空法測(cè)一些樣品中的苯系物的項(xiàng)目，樣品的濃度范圍變化很大，所以標(biāo)曲的濃度范圍設(shè)置很寬，但是檢測(cè)器的響應(yīng)與濃度的關(guān)系不是一條直線，也就是說(shuō)不是一次方程，這時(shí)可以采用分段校準(zhǔn)的方式。有的項(xiàng)目比如說(shuō)GPC測(cè)分子量分布的，由于受到色譜柱工藝等條件的限制，很難做到線性，經(jīng)常用三次方程擬合，如果擬合的曲線達(dá)不到三個(gè)九也會(huì)做五次方程的擬合。這幾種情況下就需要根據(jù)需要多做幾個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)。

當(dāng)然在各項(xiàng)擬合指標(biāo)合格的情況下，采用一次方程更符合統(tǒng)計(jì)學(xué)上參數(shù)少的統(tǒng)計(jì)簡(jiǎn)潔性原則。

補(bǔ)充：如果是分段校正，則每段需要至少兩個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)。而對(duì)于一些樣品無(wú)濃度范圍規(guī)律的，特別是一些檢測(cè)機(jī)構(gòu)，如果分析儀的檢測(cè)響應(yīng)可靠，環(huán)境因素影響少的，可以做校正曲線。若是環(huán)境因素影響大的，則不必做校正曲線，而采用標(biāo)準(zhǔn)加入法反而簡(jiǎn)便一些，比如陽(yáng)極溶出伏安法測(cè)樣品濃度。

03

Q:標(biāo)準(zhǔn)曲線為什么常見(jiàn)的是奇數(shù)個(gè)點(diǎn)？

A:其實(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線做幾個(gè)點(diǎn)，點(diǎn)分布如何，影響的是測(cè)試結(jié)果的不確定度。

好的測(cè)量應(yīng)該是不確定度小的，這在判斷樣品的結(jié)果是否超標(biāo)或是否符合限值的時(shí)候至關(guān)重要。

我們?cè)谕扑銟悠返牟淮_定度時(shí)，有兩個(gè)結(jié)論：一、標(biāo)曲的重心點(diǎn)處，所查出來(lái)的樣品不確定度小。二、標(biāo)曲的點(diǎn)數(shù)越多，樣品的不確定度越小。所以在樣品濃度的附近應(yīng)盡量多的分布標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)。奇數(shù)點(diǎn)的設(shè)置就是先通過(guò)已知信息來(lái)確定濃度范圍，在該濃度范圍內(nèi)先確定中間點(diǎn)，然后在中間點(diǎn)左右分布對(duì)稱(chēng)的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)，所以做出來(lái)的標(biāo)曲常常是奇數(shù)個(gè)點(diǎn)。

04

Q:標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度點(diǎn)如何設(shè)置？

A:對(duì)于我們分析實(shí)驗(yàn)室的一些常規(guī)理化性質(zhì)的測(cè)試，一般標(biāo)準(zhǔn)曲線的第yi個(gè)點(diǎn)是檢出限的5~10倍。以后根據(jù)一倍遞增，gao濃度是低濃度的10~20倍為宜。對(duì)于濃度范圍寬的曲線，遞增的倍數(shù)會(huì)更大，比如三倍，五倍等。這個(gè)也是要根據(jù)儀器的靈敏度來(lái)調(diào)整的。

05

Q:一元標(biāo)準(zhǔn)曲線方程各參數(shù)是什么意思？

A:一元標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y=a+bx，r² 。 其中x表示化合物濃度，y表示化合物在儀器上的響應(yīng)，a表示在y軸上的截距，b表示曲線的斜率，1/b 表示化合物的響應(yīng)因子。響應(yīng)因子可以簡(jiǎn)單快速的判斷化合物配制的準(zhǔn)確性和儀器的穩(wěn)定性，比如氘燈的能量是否正常。r表示x與y的相關(guān)系數(shù)：r越接近于1，正向相關(guān)性越好，r越接近于-1，負(fù)向相關(guān)性越好，r越接近于0，相關(guān)性越差。r² 表示判定系數(shù)，是一個(gè)統(tǒng)計(jì)學(xué)概念，當(dāng)根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行曲線擬合時(shí)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)與擬合函數(shù)之間的吻合程度，用一個(gè)與相關(guān)系數(shù)有關(guān)的一個(gè)量r²來(lái)評(píng)價(jià)：r²值越接近1，吻合程度越高，越接近0，則吻合程度越低。

06

Q:標(biāo)準(zhǔn)曲線r²值需要幾個(gè)9才合格？

A:實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)（方法）的要求使用標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。所用標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)覆蓋被測(cè)樣品的濃度范圍。檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)（方法）如無(wú)具體的要求，至少使用5個(gè)標(biāo)樣（除空白外）建立線性標(biāo)準(zhǔn)曲線，每個(gè)點(diǎn)重復(fù)測(cè)定1-3次，對(duì)于篩選方法，線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.98，對(duì)于確證方法，相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.99。

其實(shí)，大于0.99是判斷是否為線性相關(guān)的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)際應(yīng)用中線性大于0.999才是比較理想的。線性在0.99到0.999之間的監(jiān)測(cè)結(jié)果只用接近gao濃度一半（中間濃度）的位置才比較準(zhǔn)確，如果線性大于0.999的話，在整個(gè)線性范圍內(nèi)都會(huì)有一個(gè)比較滿意的結(jié)果。

如果檢測(cè)的線性不好，可以減少標(biāo)準(zhǔn)的覆蓋范圍，將標(biāo)準(zhǔn)的濃度調(diào)整到待測(cè)樣品濃度附近，這樣結(jié)果也是非常準(zhǔn)確的。例如，樣品的濃度約20ppb，但在0~50ppb范圍建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，但線性非常不理想，這時(shí)可以將標(biāo)準(zhǔn)范圍調(diào)整到15~25ppb之間，作五個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。

07

Q:相關(guān)系數(shù)的有效數(shù)字？

A:GB5750.3-2006 8.2.7項(xiàng)有如下規(guī)定：校準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)只舍不入，保留到小數(shù)點(diǎn)后出現(xiàn)非9的一位，如0.99989→0.9998。如果小數(shù)點(diǎn)后都是9時(shí)，多保留小數(shù)點(diǎn)后4位。

08

Q:標(biāo)準(zhǔn)曲線有效期有什么規(guī)定？

A:我們做好了一次曲線，我們還要保證以后每一次曲線，每一次定量都是準(zhǔn)確的，這樣就要做標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的期間核查。

（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線屬于實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的范圍，按照《實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則》中結(jié)果控制的要求：定期使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（參考物質(zhì)）進(jìn)行監(jiān)控和/或使用次級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（參考物質(zhì)）開(kāi)展內(nèi)部質(zhì)量控制。

（2）準(zhǔn)則中并未對(duì)“定期”進(jìn)行規(guī)定，所以如果“定期”，就根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況來(lái)定了。

（3）既然準(zhǔn)則上沒(méi)說(shuō)明，那根據(jù)一般的分析教材，當(dāng)實(shí)驗(yàn)條件（包括藥劑、人員、儀器等）發(fā)生變化時(shí)，hao重新制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

09

Q:標(biāo)準(zhǔn)曲線能不能長(zhǎng)期使用？

A:這就涉及到儀器的期間核查，要用標(biāo)準(zhǔn)曲線的質(zhì)控點(diǎn)進(jìn)行核查。每批樣品應(yīng)測(cè)定一個(gè)校準(zhǔn)曲線中間點(diǎn)濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，其測(cè)定濃度與校準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的濃度相對(duì)誤差不得超過(guò)規(guī)定范圍，如果超過(guò)規(guī)定相對(duì)誤差，需重新繪制校準(zhǔn)曲線。

也可以這樣說(shuō)，不同的分析項(xiàng)目，不同的分析方法，校準(zhǔn)曲線斜率的穩(wěn)定性不同。如校準(zhǔn)曲線的斜率較為穩(wěn)定，則在樣品分析時(shí)，可只測(cè)定兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)，當(dāng)此兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)與原曲線相應(yīng)點(diǎn)的相對(duì)偏差均小于5%時(shí)，可使用原校準(zhǔn)曲線。因此，樣品分析前，需根據(jù)斜率的穩(wěn)定性來(lái)確定是否需同時(shí)制作校準(zhǔn)曲線。

我們一般的做法是，根據(jù)檢測(cè)的頻率來(lái)做，如果該項(xiàng)目天天都要檢測(cè)，并且檢測(cè)量較多時(shí)，要求至少每周做一次曲線。如果檢測(cè)量上，一個(gè)月都沒(méi)有幾單的話，就一個(gè)月做一次曲線。當(dāng)然，儀器如果出現(xiàn)故障并大修后回來(lái)的，經(jīng)過(guò)檢定后，需要重新做曲線。

10

Q:標(biāo)準(zhǔn)曲線是否必須過(guò)原點(diǎn)？

A:標(biāo)準(zhǔn)曲線不一定非要過(guò)原點(diǎn)，只要線性好就可以了。因?yàn)樽隹瞻椎脑捇旧喜粫?huì)過(guò)原點(diǎn)。過(guò)原點(diǎn)是強(qiáng)制過(guò)的，實(shí)際曲線可能不過(guò)，就會(huì)造成誤差。不過(guò)原點(diǎn)是因?yàn)橛邢到y(tǒng)誤差。

針對(duì)是否過(guò)原點(diǎn)(0，0)問(wèn)題，可以從原點(diǎn)(0，0)代表的意義來(lái)考慮：

即所測(cè)組分濃度為零的時(shí)候，信號(hào)響應(yīng)值（液相色譜也就是峰高或者峰面積）是否也為零。通常來(lái)說(shuō)色譜分析是屬于這種情況的，因而可以把（0，0）點(diǎn)作為一個(gè)濃度水平計(jì)入標(biāo)準(zhǔn)曲線（甚至不需要真的去配一個(gè)濃度為零的標(biāo)準(zhǔn)溶液來(lái)進(jìn)樣），這也是單點(diǎn)法定量的一個(gè)依據(jù)；而類(lèi)似的情況在光譜法測(cè)定時(shí)就講不通了，濃度為零的標(biāo)準(zhǔn)溶液（本底）響應(yīng)信號(hào)（吸光度）往往不是零，這個(gè)時(shí)候標(biāo)準(zhǔn)曲線就不一定過(guò)原點(diǎn)了。

總結(jié)

了解各個(gè)分析項(xiàng)目校準(zhǔn)曲線斜率的穩(wěn)定性及影響穩(wěn)定性的主要因素，可決定是否能采用質(zhì)控點(diǎn)檢驗(yàn)原校準(zhǔn)曲線，省略重新制作校準(zhǔn)曲線；從校準(zhǔn)曲線斜率的變化，可判斷標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性，從而確定其標(biāo)定周期；分析低濃度樣品時(shí)，應(yīng)使用高純度的水和試劑，以減少空白值，降低樣品的分析誤差。

科學(xué)地運(yùn)用校準(zhǔn)曲線，對(duì)于降低分析成本、提高檢測(cè)質(zhì)量有著重要的意義。