HPLC，≥99.9%

通常來說，HPLC對流動相的基本要求是∶①與固定相不互溶，不發(fā)生化學反應;②對樣品有適宜的溶解度，要求k值在1～10范圍內(nèi)（可用范圍)或2～5（最佳范圍），溶解度太大，k值太小，不利于分離;溶解度太小，k值太大，可能使樣品在流動相中產(chǎn)生沉淀;⑧必須與檢測器相適應。例如用紫外檢測器，流動相本身在檢測波長處應無吸收;④流動相的粘度要小，可以降低色語柱的阻力而提高柱效;⑤純度高，不含機械雜質(zhì)。

高效液相色譜流動相的選擇及注意事項如下:

1、流動相的性質(zhì)要求。一個理想的流動相溶劑應具有低粘度、與檢測器兼容性好、易于得到純品和低毒性等特征。選好填料(固定相)后，強溶劑使溶質(zhì)在填料表面的吸附減少，相應的容量因子k降低;而蛟弱的溶劑使溶質(zhì)在填料表面吸附增加，相應的容量因子k升高。理論塔板數(shù)N一般與流動相的粘度成反比。所以選擇流動相時應從以下幾個方面考慮∶@流動相不得改變填料的任何性質(zhì)。低交聯(lián)度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時遇到某些有機相會溶脹或收縮，從而改變色諾柱填床的性質(zhì)。堿性流動相不能用于硅膠柱系統(tǒng)。酸性流動相不能用于氧化鋁、氧化鎂等吸附劑的柱系統(tǒng)。②純度。色諾柱的壽命與流動相有較大的關系，特別是其所含雜質(zhì)在柱上有大量沉積的溶劑。③與檢測圈匹配。使用紫外檢測器時，所用流動相在檢測波長下不得有吸收，或吸收很小。④粘度要低。高粘度溶劑會影響溶質(zhì)的擴散、傳質(zhì)，降低柱效，還會使柱壓增加，分離時間延長。最好選擇沸點在100C以下的流動相。

2、流動相的pH值。采用反相色譜法分離弱酸或弱堿樣品時，通過調(diào)節(jié)流動相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù)。對于弱酸，流動相的 pH值越小，組分的k值越大，當pH值遠遠小于弱酸的pKa值時，弱酸主要以分子形式存在;對弱堿，情況相反。分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%酣酸溶液;分析弱堿樣品時，通常在流動相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。

3、流動相的選擇。在化學鍵合相色譜法中，溶劑的洗脫能力直接與它的極性相關。在正相色諾中，溶劑的強度隨極性的增強而增加﹔通常采用烷經(jīng)加適量極性調(diào)整劑。反相色譜的流動相通常以水作基礎溶劑，再加入一定量的能與水互溶的極性調(diào)整劑，如甲醇、乙腈等，極性調(diào)整劑的性質(zhì)及其所占比例對溶質(zhì)的保留值和分離選擇性有顯著影響。一般情況下，甲醇-水系統(tǒng)能滿足多數(shù)樣品的分離要求，且粘度小、價格低，是反相色譜常用的流動相.

4、流動相的就過。所有溶劑使用前都必須經(jīng)0.45um 濾膜濾過，以除去雜質(zhì)，色譜純試劑也不例外。用速膜過跳時，特別要注意分清有機相濾膜和水相濾膜。有機相濾膜一般用于過濾有機溶劑，過濾水溶液時流速低或濾不動。水相濾膜只能用于過濾水溶液，嚴禁用于有機溶劑，否則濾膜會被溶解。溶有速膜的溶劑不得用于HPLC，對于混合流動相，可在混合前分別越過，如需混合后疏過，選有機相旎膜。對于冰箱過夜保存的流動相，在使用前仍建議過濾后再使用。

5、流動相的脫氣，所用流動相必須先脫氣，否則容易產(chǎn)生氣泡，影響泵的正常工作。氣泡還會影響柱的分離效率，影響檢測器的靈敏度、基線穩(wěn)定性，甚至無法檢測。此外，溶解在流動相中的氧還可能與樣品、流動相甚至固定相反應。溶解氣體還會引起溶劑pH值的變化，結(jié)果容易產(chǎn)生誤差。溶解氧能與某些溶劑(如甲醇、四氫味喃）形成有紫外吸收的絡合物，此絡合物會提高背景吸收，并導致檢測靈敏度的輕微降低，但更重要的是，會在梯度淋洗時造成基線漂移。超聲脫氣比較好，20分鐘的脫氣時間基本上就夠了。

6、流動相的制備。用高純度的試劑配制流動相，必要時照紫外分光光度法進行溶劑檢查，應符合要求，水應為新鮮制備的高純水，利用超級純水圈制得或用重蒸餾水。凡規(guī)定pH值的流動相應使用精密 pH計進行調(diào)節(jié)。應配制足量的流動相備用.

7、流動相的貯存。流動相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi)，不能貯存在塑料容圈中。因許多有機溶劑如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑劑，導致溶劑受污染。這種被污染的溶劑如用于HPLC系統(tǒng)，可能造成柱效降低。貯存容器一定要蓋嚴，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化，也防止氧和二氧化碳溶入流動相。磷酸鹽．乙酸鹽緩沖液很易長霉，應盡量新鮮配制使用。